在臨床檢驗中,EDTA二鉀作為常用的抗凝劑,廣泛應(yīng)用于全血細胞計數(shù)、血型鑒定等檢測項目。其通過與血液中的鈣離子結(jié)合,形成穩(wěn)定的螯合物,阻止凝血反應(yīng),從而維持血液樣本的液態(tài)狀態(tài)。但在實際應(yīng)用中,采血管內(nèi)的EDTA二鉀可能因多種因素影響而失去抗凝效果,導(dǎo)致血液凝固,影響檢測結(jié)果。
一、EDTA二鉀的抗凝原理與穩(wěn)定性基礎(chǔ)
EDTA二鉀(乙二胺四乙酸二鉀)的抗凝作用基于其分子結(jié)構(gòu)中的氨基和羧基基團,能與鈣離子(Ca2?)形成1:1的穩(wěn)定螯合物,使血液中游離鈣離子濃度顯著降低,凝血酶原無法轉(zhuǎn)化為凝血酶,從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白,達到抗凝目的。在干燥狀態(tài)下,EDTA二鉀具有較好的化學(xué)穩(wěn)定性,常溫下可長期保存而不發(fā)生結(jié)構(gòu)降解。
采血管生產(chǎn)過程中,通常將EDTA二鉀配制成溶液均勻噴涂于管內(nèi)壁,經(jīng)干燥后形成穩(wěn)定的抗凝涂層。當(dāng)血液注入采血管后,EDTA二鉀迅速溶解并與鈣離子結(jié)合,一般情況下,每毫升血液中加入1.5-2.2mg EDTA二鉀即可實現(xiàn)有效抗凝。
二、導(dǎo)致EDTA二鉀失效的常見因素
1、儲存條件不當(dāng):EDTA二鉀的穩(wěn)定性受溫度、濕度影響較大。若采血管長期暴露在高溫環(huán)境中,可能導(dǎo)致抗凝劑結(jié)晶風(fēng)化,失去與鈣離子結(jié)合的活性。
2、抗凝劑濃度不足或涂布不均:采血管生產(chǎn)過程中,若抗凝劑噴涂量未達標(biāo)準(zhǔn)(如每管EDTA二鉀含量低于1.2mg),可能導(dǎo)致抗凝能力不足。當(dāng)采集的血液樣本量超過采血管額定容量,會使EDTA二鉀與血液的比例失衡,無法完全螯合鈣離子,進而引發(fā)凝血。此外,抗凝劑涂布不均也是常見問題。若管內(nèi)壁涂層存在空白區(qū)域,血液接觸該區(qū)域時因缺乏EDTA二鉀,易發(fā)生局部凝固,形成肉眼難以察覺的小凝塊,尤其在樣本運輸或離心過程中可能堵塞檢測儀器管路。
3、血液樣本采集與處理不當(dāng):采血操作不規(guī)范可能間接導(dǎo)致EDTA二鉀失效。若采血管未充分混勻(一般需顛倒8-10次),EDTA二鉀無法與血液充分接觸,也會導(dǎo)致抗凝不完全。此外樣本處理延遲同樣存在風(fēng)險。采集后的血液樣本若在室溫下放置超過2小時,即使EDTA二鉀濃度正常,也可能因細胞代謝釋放鈣離子,或血小板活化釋放凝血因子,引發(fā)緩慢凝血。尤其在夏季高溫環(huán)境中,這種現(xiàn)象更為明顯。
三、EDTA二鉀失效的判斷與影響
1、失效的直觀與實驗室判斷:肉眼觀察可見血液樣本中出現(xiàn)絮狀沉淀、凝塊或纖維絲,EDTA二鉀可能失效。離心后血清與血細胞界面出現(xiàn)膠凍狀物質(zhì),或血細胞層上方有血凝塊,均為抗凝失敗的典型表現(xiàn)。
2、對檢測結(jié)果的具體影響:EDTA二鉀失效導(dǎo)致的血液凝固,會對多項檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。在血常規(guī)檢測中,血凝塊會被儀器誤判為白細胞或血小板,導(dǎo)致計數(shù)偏高;紅細胞因聚集會使平均紅細胞體積(MCV)、紅細胞分布寬度(RDW)等參數(shù)失真。此外,凝固的血液樣本無法用于分子生物學(xué)檢測(如PCR),因細胞破裂釋放的核酸酶會降解目標(biāo)核酸。
EDTA二鉀抗凝劑在特定條件下確實存在失效風(fēng)險,其失效與儲存環(huán)境、生產(chǎn)質(zhì)量、操作規(guī)范密切相關(guān)。通過加強采血管儲存管理、優(yōu)化生產(chǎn)工藝、規(guī)范采血與樣本處理流程,可顯著降低失效概率。實驗室工作人員應(yīng)提高對EDTA二鉀失效的識別能力,及時發(fā)現(xiàn)并處理抗凝失敗的樣本,以保障檢驗結(jié)果。
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