為實(shí)驗(yàn)選擇合適的生物緩沖液可能很棘手。這個(gè)過程就像玩“猜猜誰”。像游戲一樣，您從非常廣泛的緩沖劑列表開始，然后慢慢地提出問題和研究答案以縮小選擇范圍。到目前為止，您已經(jīng)了解了很多關(guān)于的知識(shí)，并且正在尋找更多有關(guān)此小游戲的指南。在本文中，將會(huì)介紹在選擇生物緩沖劑時(shí)您應(yīng)考慮的事項(xiàng)。 

步驟1：確定實(shí)驗(yàn)的pH

在許多實(shí)驗(yàn)中，您需要更改條件以使蛋白質(zhì)在溶液中保持滿意狀態(tài)。舉例來說，假設(shè)您在pH 7.4的條件下進(jìn)行了模擬生物條件的實(shí)驗(yàn)，但是您的蛋白質(zhì)在此pH值下不穩(wěn)定，因此您需要優(yōu)化這種情況。要記住的一件事，目標(biāo)pH值通常離蛋白質(zhì)等電點(diǎn)（pI）大約一個(gè)pH單位（有時(shí)稍遠(yuǎn)）。pI是給定的分子或蛋白質(zhì)不帶凈電荷的pH值。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)達(dá)到其pI時(shí)，它的溶解度就不會(huì)那么高。

步驟2：提出正確的問題

就像游戲一樣，您必須提出正確的問題，以確保獲得正確的緩沖。在這里還是要重點(diǎn)介紹一些重要的問題：

1.溶液中是否存在可能與緩沖液絡(luò)合的金屬？

2.您的目標(biāo)蛋白是一種酶嗎？它屬于哪一類？

3.配體結(jié)合，蛋白質(zhì)穩(wěn)定性或電泳的離子強(qiáng)度要求是什么？

4.現(xiàn)有哪些文獻(xiàn)告訴我建議的緩沖劑與所用系統(tǒng)的相互作用？

所有這些問題，將進(jìn)一步幫助您找到最適合實(shí)驗(yàn)的緩沖劑。 

步驟3：考慮下游實(shí)驗(yàn)

研究人員經(jīng)常遇到的一個(gè)絆腳石是，發(fā)現(xiàn)選擇的緩沖劑不適用于下游應(yīng)用。例如，已知Tris會(huì)對布拉德福德分析產(chǎn)生負(fù)面影響。其他生物緩沖液會(huì)對質(zhì)譜產(chǎn)生負(fù)面影響?；蛟S您可能已經(jīng)縮小了緩沖區(qū)的范圍，只是發(fā)現(xiàn)它在將來可能無法很好地工作。這就像“猜猜誰”的噩夢般的版本。在這種情況下，您必須進(jìn)行一些研究以找到合適的替代方法。但是，既然您已經(jīng)縮小了所需的特征，那么進(jìn)行這項(xiàng)研究就會(huì)容易一些。

步驟4：尋找合適的緩沖劑

太好了，現(xiàn)在您確切知道要使用什么緩沖劑了，到了采購環(huán)節(jié)，對于大多數(shù)研究人員而言，底價(jià)和純度基本上是在購買緩沖液的重要標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)然，您可以去找比較有名的企業(yè)，咨詢這個(gè)企業(yè)在業(yè)內(nèi)的口碑。在這里推薦一家企業(yè)，不僅提供出色的緩沖劑產(chǎn)品（TRIS、HEPES、BICINE、CAPS等熱門產(chǎn)品）。而且還提供了出色的內(nèi)容和服務(wù)支持，可幫助您進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，重要的是，價(jià)格相對其他廠家更具競爭力。